Hi
https://bit.ly/2HZCcqy
Yumna
Friday, March 23, 2018
Thursday, October 8, 2015
DASAR-DASAR KEAMANAN BEKERJA DI LABORATORIUM
Laboratorium adalah tempat untuk melakukan eksperimen atau penelitian atau pemeriksaan untuk menunjang penegakan diagnosis penyakit tertentu (laboratorium diagnostik). Prosedur kerja di laboratorium harus dipahami dengan baik untuk menghindari risiko cidera, kontaminasi infeksi atau hal-hal yang tidak diinginkan lainnya. Oleh karena itu, prinsip kemanan (safety) kerja di laboratorium perlu diketahui, dipahami dan dilaksanakan oleh semua pihak yang bekerja di laboratorium demi keselamatan bersama.
Keamanan kerja di laboratorium sangat penting diperhatikan, misalnya di laboratorium mikrobiologi, untuk menghindari kemungkinan kontaminasi infeksi. Meskipun mikroorganisme di laboratorium mikrobiologi yang digunakan untuk mendukung proses pembelajaran di fakultas kedokteran merupakan mikroorganisme yang tidak membahayakan bagi kesehatan manusia (non patogen), namun banyak tipe mikroorganisme yang potensial bersifat patogenik; artinya, mikroorganisme tersebut tidak akan menimbulkan penyakit infeksi pada individu yang sehat tetapi dapat menimbulkan infeksi misalnya jika dalam jumlah besar mengenai individu yang compromised,misalnya melalui kulit yang terluka.
Badan kesehatan dunia (WHO: world health organization) telah memberikan pedoman kemanan dan keselamatan kerja di laboratorium. Menurut WHO, terdapat 4 kelompok mikroorganisme yakni:
1. Kelompok mikroorganisme yang tidak mungkin atau sangat rendah kemungkinannya menimbulkan penyakit pada hewan atau manusia. Jadi, tidak ada risiko atau risiko rendah untuk individu maupun masyarakat.
2. Kelompok patogen yang dapat menimbulkan penyakit pada hewan atau manusia namun tidak membahayakan bagi pekerja laboratorium, masyarakat atau lingkungan. Jika terpapar patogen ini di laboratorium bisa menimbulkan infeksi serius namun infeksi ini dapat dicegah dan diobati secara efektif serta penyebaran atau penularan infeksi sangat minimal. Jadi, mikroorganisme ini mempunyai risiko sedang untuk individu dan risiko rendah untuk komunitas.
3. Kelompok mikroorganisme yang biasanya dapat menimbulkan infeksi serius pada individu namun biasanya tidak menyebar dari satu pasien ke orang lain. Tersedia tindakan pencegahan dan pengobatan yang efektif terhadap infeksi akibat patogen kelompok ini. Jadi, mikrooganisme ini mempunyai risiko tinggi untuk individu namun risiko rendah untuk masyarakat.
4. Kelompok mikroorganisme yang biasanya menimbulkan infeksi pada individu maupun masyarakat serta dengan mudah ditularkan dari satu orang ke orang lain baik secara langsung maupun tidak langsung. Tindakan pencegahan dan pengobatan yang efektif tidak tersedia. Jadi, risiko tinggi baik untuk individu dan masyarakat.
Pengelompokan jenis mikroorganisme tersebut berhubungan dengan tingkat keamanan di laboratorium atau biosafety level yang diperlukan.
Oleh karena itu, laboratorium dikelompokkan menjadi 4 kelompok yakni laboratorium dengan biosafety level 1 (BSL1), BSL2, BSL3 dan BSL4. Pengelompokan tersebut berdasarkan peruntukan dan fasilitas yang terdapat di laboratorium, terutama fasilitas atau perlengkapan untuk keselamatan (safety equipment).
Laboratorium BSL1: standar sesuai dengan standard laboratorium mikrobiologi, tidak memerlukan peralatan untuk pengendalian infeksi secara khusus (containment equipment).
Laboratorium BSL2: seperti BSL1 ditambah persyaratan seperti tersedianya peralatan dekontaminasi limbah infeksius, adanya tanda ‘biohazard’, dan akses ke laboratorium yang terbatas (tidak boleh sembarang orang masuk), serta tersedia peralatan untuk pengendalian infeksi.
Laboratorium BSL3: BSL2 ditambah persyaratan baju laboratorium yang khusus dan peralatan pengendalian infeksi lebih lengkap
Laboratorium BSL4: memerlukan persyaratan perlengkapan pengendalian infeksi secara maksimal, semua limbah harus sudah didekontaminasi sebelum keluar dari laboratorium.
Untuk keperluan pengajaran (praktikum) dan riset sederhana dengan mikroorganisme kelompok risiko yang pertama (seperti telah disebutkan di atas), cukup menggunakan laboratorium BSL1. Laboratorium diagnostik dan riset yang memerlukan perlengkapan keamanan yang lebih ketat, menggunakan fasilitas BSL2. BSL3 biasanya digunakan untuk keperluan diagnostik dan riset yang lebih khusus dan lebih ketat kaitannya dengan pencegahan infeksi, sedangkan BSL4 diperlukan jika bekerja dengan patogen yang sangat berbahaya dan sangat infeksius.
Pada BSL1, kegiatan cukup dilakukan di meja terbuka (open bench) dan tidak memerlukan safety equipment yang khusus. Pada BSL2, sudah mulai digunakan biosafety cabinet yakni salah satu safety equipment untuk menghindari kontaminasi dari infeksi secara aerosol. Pada BSL3 dan 4, biosafety cabinet yang digunakan lebih khusus dan dilengkapi dengan safety equipment lainnya.
Menurut WHO, fasilitas laboratorium di BSL2 sebaiknya memenuhi syarat berikut ini:
- Desain laboratorium memungkinkan laboratorium mudah dibersihkan
- Tersedia wastafel atau tempat untuk mencuci tangan
- Permukaan meja (bench) di laboratorium hendaknya tahan air (tidak mudah basah), dan resisten terhadap alkali, asam dan pelarut organik
- Tersedia autoclave
- Mempunyai penerangan yang cukup
- Tersedia ruang penyimpanan yang cukup.
PRINSIP KEAMANAN BEKERJA DI LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Prinsip kehati-hatian dan keamanan selama bekerja di laboratorium mikrobiologi harus dipahami dan diterapkan oleh semua pengguna laboratorium (misalnya mahasiswa, laboran, analis atau peneliti). Setiap prosedur yang dilakukan harus memperhatikan standar keamanan dengan tujuan:
- Membatasi agar mikroorganisme yang terdapat di spesimen atau di media kultur tetap berada di tempatnya tersebut (yakni di kontainer spesimen atau di media kultur)
- Mencegah mikroorganisme yang berada di lingkungan (normalnya terdapat di kulit, rambut, baju laboratorium, meja laboratorium atau di udara) agar tidak masuk atau mengkontaminasi spesimen atau media kultur sehingga tidak mempengaruhi hasil pemeriksaan atau penelitian.
Bekerja di laboratorium mikrobiologi berhubungan dengan mikroorganisme. Sifat-sifat fisiologis mikroorganisme seperti kemampuan tumbuh, reproduksi dan reaksi-reaksi biokimiawinya perlu dipahami sehingga kita bisa memperlakukan mikroorganisme dengan sebaik-baiknya, misalnya dengan mengetahui bagaimana baktei itu bisa ditularkan, maka kita bisa berhati-hati mencegah penularan tersebut.
Risiko infeksi bisa terjadi ketika melakukan prosedur teknik di laboratorium mikrobiologi seperti melakukan kultur atau inokulasi bakteri, dari alat-alat atau fasilitas (misal meja pemeriksaan atau bench) di laboratorium, organisme atau spesimen yang diteliti atau diperiksa. Selain itu kecelakaan kerja dapat menimbulkan risiko infeksi misalnya pecahnya petri dish yang mengandung mikroorganisme.
Masuknya mikroorganisme ke tubuh bisa melalui microbial aerosol yakni adanya fine droplets atau tetesan air yang berisi sel atau spora dari bakteri yang dilepaskan ke udara (tidak terlihat) dan bisa masuk ke dalam paru-paru. Aerosol bisa terjadi ketika terjadi spill atau tumpahan spesimen atau material yang mengandung mikroorganisme. Selain itu, penyebaran aerosol bisa berasal dari semprotan uap dari mulut botol, pada saat membakar ose, pada saat membuka tutup petri dish atau pada saat terjadi pengocokan mekanik. Jalan lain yakni, akibat tindakan yang tidak hati-hati, mikroorganisme bisa masuk melalui inokulasi di kulit yang terluka atau tergigit binatang percobaan.
Beberapa yang bisa menjadi sumber infeksi adalah selain mikroorganisme atau spesimen, binatang percobaan, alat dan fasilitas yang ada di laboratorium seperti media, meja praktikum atau meja pemeriksaan (bench). Oleh karena itu sebagai langkah hati-hati, tidak boleh menyentuh apa pun benda di laboratorium jika tidak perlu atau tidak berhubungan dengan tindakan pemeriksaan yang dilakukan. Prosedur desinfeksi dan sterilisasi harus diterapkan untuk mencegah potensi penularan dari sumber infeksi.
Beberapa mikroorganisme yang penting yang mungkin ditularkan di laboratorium mikrobiologi (terutama mikrobiologi klinik) adalah:
- Virus : hepatitis B, HIV
- Bakteri : Salmonella spp termasuk Salmonella typhi, Brucella spp, Bacillus antracis, Shigella spp, Leptospira spp, Yersinia pestis, Mycobacteria spp
- Jamur: Histoplasma spp
Beberapa tindakan yang dilakukan untuk mencegah infeksi yang mungkin terjadi di laboratorium adalah:
- Melakukan sterilisasi secara optimal limbah infeksius sebelum dibuang
- Menyediakan ‘receptacle’ atau tempat khusus untuk pecah belah (gelas) yang terkontaminasi
- Menyediakan safety hood atau biosafety cabinet
- Memeriksa dan membuang jaringan (spesimen pasien) dengan tepat sesuai SOP (standard operating procedure). Ini terutama di laboratorium mikrobiologi klinik (untuk diagnostik)
- Secara rutin melakukan cuci tangan dan membersihkan meja pemeriksaan atau meja praktikum (bench) sebelum dan setelah kegiatan yang dilakukan
- Memakai sarung tangan
- Menyediakan pipet mekanik (jangan menggunakan pipet mulut)
- Menjaga pasien dengan infeksi kulit atau saluran napas dari staf laboratorium
- Menyediakan tempat pembuangan khusus untuk benda tajam (jarum, spuit injeksi).
Teknik Pipetting
Jenis pipet bermacam-macam. Pemilihan berdasarkan kemudahan penggunaan dan tipe pekerjaan yang dilakukan. Ada beberapa hal yang harus diperhatikan berkaitan dengan penggunaan pipet pada spesimen infeksius.
- Hati-hati dalam mencampur spesimen, yakni pelan-pelan dalam melakukan suction dan expulsion secara bergantian
- Tidak terlalu kuat memencet pipet (untuk mengeluarkan cairan dari dalam pipette)
- Meneteskan spesimen (cairan) dari pipet sedekat mungkin dengan media (jaraknya tidak terlalu jauh)
- Menyumbat ujung pipet dengan kapas
- Meletakkan pipet yang terkontaminasi ke dalam cairan yang mengandung desinfektan yang sesuai
Urutan tindakan yang dilakukan ketika terjadi tumpahan material atau spesimen di laboratorium adalah:
- Perlindungan personel (orang)
- Lokalisasi area kontaminasi
- Dekontaminasi personel
- Dekontaminasi area yang terkena kontaminasi
Prosedur dekontaminasi:
- Dekontaminasi kulit: Area yang tekena tumpahan dicuci dengan sabun dan air. Jangan menggunakan deterjen atau material yang bersifat abrasive dan hati-hati jangan sampai merusak kulit.
- Dekontaminasi daerah akibat luka potong atau mata: irigasi dengan air secara hati-hati untuk mencegah penularan dari satu area ke area lainnya.
- Dekontaminasi pakaian: pakaian yang terkena tumpahan harus diambil secepatnya dan ditaruh di container. Jangan menaruh di tempat lain atau keluar dari area kontaminasi sebelum kontaminasinya dihilangkan.
- Dekontaminasi tempat kerja (misal permukaan meja):
1. Genangi dengan desinfekatan
2. Biarkan selama 10 menit
3. Lap dengan kertas atau kain absorbent (bisa menyerap)
4. Gunakan sarung tangan sekali pakai (disposable), kacamata pengaman (safety google), apron
5. Jika menggunakan sikat atau forsep, alat tersebut juga harus didesinfeksi
6. Jika tumpahan darah atau virus, gunakan hipoklorit 10g/L
7. Gunakan activated gluteraldehyde (20g/L) pada permukaan untuk dekontaminasi viral
8. Tempatkan semua material yang potensial terkontaminasi di container yang terpisah sampai kontaminasi telah dibersihkan
9. Akses ditutup sampai kontaminasi benar-benar telah diatasi
STERILISASI
Sterilisasi sangat penting dalam mikrobiologi. Semua alat (misalnya ose, pipet, tabung reaksi,petri dish, mikroskop, media kultur) dan bahan (misalnya reagen kimia untuk membuat kultur) harus steril atau bebas dari mikroba baik dalam bentuk vegetative maupun spora.
Keadaan tidak steril bisa membingungkan hasil pemeriksaan, jika positif ditemukan bakteri, akan sulit diinterpretasi apakah memang bakteri itu berasal dari spesimen pasien atau karena alat dan bahan yang memang sejak awal tidak steril. Untuk menghindari hasil positif palsu tersebut, sterilitas harus diperhatikan selama prosedur analisis mikrobiologis.
Sterilisasi adalah proses untuk membunuh semua mikroorganisme hidup,baik bentuk vegetative maupun sporanya. Berbeda dari sterilisasi, desinfeksi hanya membunuh sebagian besar mikroorganisme. Desinfeksi tingkat tinggi akan membunuh semua mikroba status vegetative namun tidak mampu membunuh bakteri berspora yang resisten.
Beberapa metode sterilisasi yang dapat dilakukan adalah:
1. Pemanasan
Pemanasan dapat dilakukan secara kering dan basah.
Secara kering, dapat dilakukan dengan cara:
1) pembakaran (misal ose kawat, pinset) dilakukan pada alat dari logam;
2) oven atau hot air oven. Dilakukan dalam sterilisator udara panas untuk alat-alat dari gelas, bahan minyak dan powder. Bahan dari karet,kain, kapas dan kasa tidak bisa dengan cara ini. Alat yang akan dioven dicuci dulu, dikeringkan lalu dibungkus dengan kertas tahan panas, lalu dimasukkan ke dalam oven dan dipanaskan pada suhu 150-170 derajat celcius selama 90-120 menit. Diantara bahan yang disterilisasi harus terdapat ruang yang cukup agar pergerakan udara tidak terhambat.
Pemanasan basah, dilakukan dengan:
1). Merebus : untuk mensterilkan misalnya gunting, pinset,jarum, direbus dalam air mendidih selama 30-60 menit
2) Dengan uap air panas: untuk media yang tidak bisa dengan cara autoklaf. Pemanasan dilakukan pada suhu 100 derajat celcius selama 1 jam.
3) Dengan autoklav (uap air bertekanan): dilakukan pada media dan alat yang tahan terhadap panas tinggi. Pengatur tekanan dalam autoklav dapat diatur untuk mendapatkan panas yang diinginkan. Biasanya dilakukan pada suhu 120 derajat celcius selama 10-70 menit. Pengaturan tekanan harus hati-hati karena perubahan suhu dan tekanan yang mendadak dapat menyebabkan pecahnya alat pecah belah.
4). Pasteurisasi: untuk mensterilkan susu, dengan cara memanaskan pada suhu 61,7 derajat celcius selama 30 menit.
2. Radiasi
Dilakukan dengan menggunakan misalnya sinar gamma, ultraviolet, dan sinar X. SInar UV dengan panjang gelombang 260-270 nm mempunyai daya bakterisid yang tinggi. Sinar X mempunyai daya penetrasi lebih besar dibandingkan sinar UV. Sinar gamma mempunyai daya penetrasi lebih besar daripada sinar X sehingga dapat digunakan untuk mensterilkan material yang tebal.
3. Kimiawi
Dengan cara menggunakan bahan-bahan kimiawi. Beberapa bahan kimia yang bersifat anti mikroba adalah:
1. Fenol dan derivatnya: mempresipitasikan protein atau merusak selaput sel dengan penurunan tegangan permukaan. Daya antimikroba berkurang pada suasana alkali, suhu rendah dan adanya sabun.
2. Alkohol: mendenaturasi protein, menginaktifkan enzim-enzim bakteri. Etil alcohol (etanol) 50-70% bersifat bakterisid untuk bentuk vegetative. Metanol kurang bresifat bakterisid dibandingkan etanol.
3. Halogen beserta gugusannya, misalnya yodium dan hipoklorit. Cara kerja dengan mengoksidasi protein sehingga merusak membrane dan menginaktifkan enzim.
4. Logam berat dan gugusannya, misal perak nitrat, bekerja dengan cara mempresipitasikan protein dan menginaktifkan enzim mikroba.
5. Deterjen : merusak membrane sitoplasma sel
6. Aldehid, contohnya formalin, bekerja dengan cara mendenaturasi protein.
BAHAN KIMIA
Di laboratorium juga digunakan bahan-bahan kimia. Setiap orang yang bekerja di laboratorium harus mengetahui sifat-sifat bahan kimia tersebut untuk menghindari risiko kecelakaan yang mungkin terjadi dan mengetahui cara penanggulangannya jika terjadi kecelakaan akibat bahan kimia tersebut.
Risiko kecelakaan yang ditimbulkan oleh bahan-bahan kimia dapat berupa terjadi luka bakar, terjadi kebakaran, ledakan, trauma kimiawi bahkan kecacatan. Oleh karena itu harus cermat membaca label kemasan bahan kimia sehingga mengetahui dengan benar tentang bagaima cara menyimpan, cara membuat aliquot (menyimpan dalam volume kecil), bagaimana cara menggunakan, bagaimana caa membuang sisanya serta mengetahui efek samping atau risiko jika terkena bahan kimia tersebut beserta penanggulangannya.
Bahan kimia yang tergolong dalam B3 (berbau, berbahaya dan beracun) adalah bahan-bahan kimia yang bersifat:
1. Mudah meledak (eksplosif)
2. Pengoksidasi (oxidizer)
3. Mudah terbakar (flammable)
4. Sangat mudah terbakar (highly flammable)
5. Amat sangat beracun (extremely toxic)
6. Sangat beracun (highly toxic)
7. Beracun (moderately toxic)
8. Korosif (corrosive)
9. Menyebabkan iritasi (irritative)
10. Berbahaya bagi lingkungan (dangerous to the environment)
11. Karsinogenik (carcinogenic) atau memicu terjadinya kanker
12. Teratogenik (teratogenic) atau menyebabkan terjadinya cacat kongenital
13. Embryotoxic (toksik terhadap embrio, berakibat kematian embrio atau pun cacat/efek teratogenik)
14. Mutageniik (mutagenic) atau menyebabkan terjadinya mutasi gen
Beberapa contoh bahan-bahan kimia dan risiko/efek yang bisa ditimbulkan adalah sebagai berikut:
1. Bahan kimia bersifat embriotoksik
- Benzene
- Chloroform
- Formaldehyde
- Nitrous oxide
- Toluene
- Propylene gycol
2. Bahan kimia yang bersifat karsinogenik
- Aflatoxin B1
- Dimethylcarbamoyl chloride
- Hexamethylphosphoramide
3. Bahan kimia bersifat mengoksidasi (oxidizer)
- Peroxide
- Nitrat
- Nitrit
- Chlorate
4. Bahan kimia yang mudah terbakar
- Acetone
- Diethyl eter
- Isopropyl alcohol
Dan masih banyak contoh lainnya
Beberapa prinsip yang harus diperhatikan ketika bekerja dengan bahan kimia adalah:
- Baca label bahan kimia dengan teliti
- Hindari kontak langsung dengan bahan kimia
- Hindari menghirup langsung uap bahan kimia
- Jangan mencicipi atau mencium bahan kimia (kecuali ada indikasi dan ada perintah, serta lakukan dengan aman)
- Gunakan bahan kimia seperlunya. Jika tersedia volume besar, misal 500 ml dan Anda hanya perlu 2 ml, buatlah aliquot atau ambillah sedikit volume dan pindahkan ke tabung yang lain (misal ambil 10 ml dari 500 ml tersebut, lalu ambil 2 ml dari yang 10 ml tadi. Jika perlu 2 ml lagi, ambil dari sediaan aliquot tadi). Ini untuk menghindari kontaminasi di tabung dengan volume besar tadi.
- Jika memanaskan larutan kimia di dalam tabung reaksi, isi tabung reaksi dengan bahan kimia sebanyak sepertiga isi tabung. Ketika memanaskan, arahkan mulut tabung reaksi pada arah yang aman (jangan mengarah ke muka Anda atau muka orang lain) untuk menghindari bahaya percikan atau kontaminasi (jika ada).
ATURAN UMUM
Secara umum, hal-hal yang harus diperhatikan demi keselamatan dan keamanan di laboratorium adalah:
- Prosedur laboratorium harus dipahami sebelum melakukan kegiatan di laboratorium
- Memakai jas laboratorium
- Memakai sepatu tertutup, untuk menghindari terkena tumpahan specimen atau bahan kimia, atau pecahan material di laboratorium. Usahakan bahan sepatu yang tidak menyerap (sol sepatu tidak menyerap air) dan alas tidak licin.
- Memakai kacamata pengaman (jika ada indikasi)
- Tidak makan, minum atau merokok di lingkungan laboratorium
- Tidak minum menggunakan gelas (glassware) laboratorium
- Meletakkan semua buku dan alat tulis di locker, tidak di meja, kecuali buku petunjuk laboratorium/praktikum
- Tidak boleh melakukan sesuatu kegiatan di laboratorium tanpa bimbingan sebelumnya atau tanpa pengawasan
- Menutup/mematikan kembali setelah memakai api spiritus, untuk menghindari risiko kebakaran
- Menjaga jari, pensil, ose (bacteriological loop) agar selalu jauh dari mulut
- Tidak memakai perhiasan
- Tidak menggunakan lidah (menjilat) untuk menempelkan label. Gunakan air kran.
- Tidak mondar mandir di laboratorium karena dapat: menimbulkan kecelakaan, mengganggu orang lain dan bisa menimbulkan kontaminasi.
- Tidak banyak bicara (ngobrol) yang tidak perlu.
- Tidak menggunakan handphone ketika sedang melakukan kegiatan di laboratorium
- Tidak meletakkan pipet atau alat lainnya yang terkontaminasi di bench (meja)
- Tidak meletakkan ose yang telah dipakai di meja. Letakkan ose, selalu di tempatnya
- Tidak membuang kultur,gelas, tabung atau gelas objek (slide) yang terkontaminasi ke tempat sampah umum. Harus dibuang di tempat sampah khusus infeksius.
- Menggunakan sentrifus, shaker dan semua alat di laboratorium dengan hati-hati, sesuai prosedur
- BERTANYA jika tidak tahu tentang suatu prosedur kerja atau cara memakai alat
- Vaksinasi, untuk mencegah penyakit misalnya hepatitis B.
- Jika terjadi kecelakaan di laboratorium, laporkan kepada pengawas secepatnya agar segera diberi pertolongan.
Demikianlah garis besar prinsip keamanan bekerja di laboratorium. Yang terpenting dari semuanya adalah kedisiplinan. Sedetail apa pun aturan dibuat, jika dilanggar maka akan membawa dampak merugikan bagi diri sendiri dan bisa merugikan orang lain.
SAFE HABIT WILL SAVE YOUR LIFE !!
Daftar Pustaka:
Environmental Health and Safety Department. 2011. Laboratory Safety Manual. University of Texas, Austin.
Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention, National Istitute for Occupational Safety and Health. 2006. School Chemistry Laboratory Guide.
Departemen MIkrobiologi FK UGM. Petunjuk Praktikum Mikrobiologi.
World Health Organization. 2004. Laboratory Safety Manual. Geneva
World Health Organization. 2006. Blood Safety and Clinical Technology; Guidelines on Standard Operating Procedures for Microbiology. http://www.searo.who.int/en/Section10/Section17/Section53/Section482_1789.htm
Lampiran:
Contoh setting laboratorium BSL1
,
Contoh setting laboratorium BSL2
Contoh setting laboratorium BSL3
Thursday, January 14, 2010
RANGKUMAN METODE IDENTIFIKASI BAKTERI
by Yumna
1. GRAM POSITIVE COCCI 1.1. Staphylococcus aureus Staphylococci yang bersifat patogenik umumnya menyebabkan infeksi akut baik pada manusia maupun hewan. Spesies yang menyebabkan infeksi akut pada manusia antara lain Staphyloccus aureus. Salah satu cara yang paling umum digunakan untuk mengidentifikasi organisme ini adalah berdasarkan kemampouan bakteri untuk menggumpalkan plasma Beberapa metode identifikasi : Pengecatan Gram à Kokus (coccus) Gram positif dengan susunan bergerombol seperti anggur (clumps) Tes katalase à positif. Jika katalase negatif, lihat pada bab Streptococcus dan Enterococcus Staphylococcal latex agglutination test à positif. S. Ludgunensis dan S. Schleiferi juga dapat memberikan hasil positif pada tes aglutinasi lateks ini. Jika hasil meragukan, lakukan tube coagulase test. Tube coagulase test Lakukan tube coagulase test jika ada keraguan pada hasil test aglutinasi lateks Staphylococcus (Staphylococcal latex agglutination test) 1.2. Coagulase negative Staphylococci Strain ini dapat menyebabkan infeksi yang berkaitan dengan pemakaian kateter vaskuler dan peralatan prostesis implan lainnya (implanted prosthetic devices). Beberapa metode identifikasi : Pengecatan Gram à Kokus (coccus) Gram positif dengan susunan bergerombol seperti anggur (clumps) Tes katalase à positif. Jika katalase negatif, lihat pada bab Streptococcus dan Enterococcus Staphylococcal latex agglutination test à negatif Tube coagulase test Lakukan tube coagulase test jika ada keraguan pada hasil test aglutinasi lateks Staphylococcus (Staphylococcal latex agglutination test) Tes lanjutan untuk identifikasi isolat yang signifikan secara klinis Identifikasi dengan mesin VITEK 1.3. Staphylococcus saprophyticus S. saprophyticus adalah bakteri patogen di saluran kemih (traktus urinarius) terutama pada wanita muda. Biasanya bakteri ini resisten terhadap antibiotik novobiocin, namun pada spesies klinik lainnya, resistensi tersebut jarang ditemukan. Beberapa metode identifikasi : Pengecatan Gram à Kokus (coccus) Gram positif dengan susunan bergerombol seperti anggur (clumps) Tes katalase à positif. Jika katalase negatif, lihat pada bab Streptococcus dan Enterococcus Staphylococcal latex agglutination test à negatif. Isolat dapat mengalami ko-aglutinasi Tube coagulase test Lakukan tube coagulase test jika ada keraguan pada hasil test aglutinasi lateks Staphylococcus (Staphylococcal latex agglutination test) Untuk isolat yang berasal dari saluran kemih, lakukan novobiocin resistance test, dengan menggunakan metode CLSI Disc Diffusion Test. Resisten terhadap novobiocin ditunjukkan dengan terjadinya zona hambatan dengan diameter < 16 mm Tes lanjutan untuk identifikasi isolat yang signifikan secara klinis Identifikasi dengan mesin VITEK 1.4. Streptococcus sp Streptococci dapat diisolasi dari saluran pencernaan, pernafasan dan saluran genital sebagai bagian dari bakteri komensal atau flora normal. Beberapa spesies dapat bersifat patogen, antara lain adalah Streptococcus pyogenes (Streptococcus grup A) yang merupakan patogen utama pada manusia dan Streptococcus agalactiae (Streptococcus grup B) dapat menyebabkan infeksi pada neonatus. Beberapa metode identifikasi : Pengecatan Gram à Kokus (coccus) Gram positif dengan susunan berpasangan seperti rantai (chains). Tes katalase à negatif. Jika katalase positif, lihat pada bab Staphylococcus aureus dan Staphylococcus sp Sifat hemolisis. Tentukan sifat hemolisis bakteri berdasarkan reaksi terhadap sel eritrosit pada media agar darah. - Hemolisis alfa : terbentuk zona hambatan di sekeliling koloni berwarna kehijauan sampai kecoklatan. Diskolorisasi medium ini terjadi akibat destruksi eritrosit parsial. - Hemolisis beta : terbentuk zona hambatan yang jelas, tidak berwarna (colourless) di sekitar koloni akibat destruksi eritrosit secara sempurna. Beberapa strain dapat melakukan hemolisis sempurna (maksimal) dalam keadaan anaerob, karena hemolisin yang diproduksi oleh beberapa strain tersebut bersifat labil jika ada oksigen. - Hemolisis gamma atau non hemolitik : tidak terjadi hemolisis eritrosit atau tidak terjadi diskolorisasi media agar darah --à to be continued Tes lanjutan untuk identifikasi isolat yang signifikan secara klinis Identifikasi dengan mesin VITEK 1.5. Streptococcus pneumoniae |
See what's on at the movies in your area. Find out now.
Tuesday, January 5, 2010
Pengecatan Gram
By Yumna Pengecatan Gram merupakan salah satu teknik pengecatan yang dikerjakan di laboratorium mikrobiologi untuk kepentingan identifikasi mikroorganisme. Morfologi mikroskopik mikroorganisme yang diperiksa dan sifatnya yang khas terhadap pengecatan tertentu (pengecatan Gram) dapat digunakan untuk identifikasi awal. Pemeriksaan ini dapat dilakukan dengan cepat dan biaya murah serta, dalam kasus tertentu, dapat membantu dokter untuk memulai terapi suatu penyakit tanpa menunggu hasil kultur. Metode pengecatan tersebut pertama kali ditemukan oleh Christian Gram pada tahun 1884. Dengan metode pengecatan Gram, bakteri dapat dikelompokkan menjadi dua, yaitu bakteri Gram positif dan Gram negatif berdasarkan reaksi atau sifat bakteri terhadap cat tersebut. Reaksi atau sifat bakteri tersebut ditentukan oleh komposisi dinding selnya. Oleh karena itu, pengecatan Gram tidak bisa dilakukan pada mikroorganisme yang tidak mempunyai dinding sel seperti Mycoplasma sp. PERSIAPAN Sebelum dilakukan pengecatan Gram, tentu harus disiapkan bahan (spesimen) yang akan diperiksa. Bahan yang akan diperiksa, dapat berasal dari : 1) langsung dari penderita dapat berupa sputum (dahak), pus (nanah), discharge telinga, discharge hidung, urin dan cairan serebrospinal. Spesimen yang akan dicat, sebelumnya dibuat sediaan atau preparat (smear) terlebih dulu. Pengertian preparat adalah sampel spesimen yang diletakkan atau dioleskan pada permukaan gelas obyek (object glass) atau slides, dengan atau tanpa pewarnaan, yang selanjutnya dapat diamati di bawah mikroskop. a. Pembuatan preparat Alat dan bahan yang diperlukan adalah : Alat :
Bahan :
Untuk bahan yang berbeda, memerlukan cara pembuatan preparat yang berbeda pula. Berikut cara pembuatan preparat untuk berbagai sumber bahan. a.1. Bahan langsung dari penderita Bahan disentrifuge terlebih dulu, kemudian endapannya dibuat preparat. Bahan yang berupa endapan (pellet) hasil sentrifuge tersebut diambil dengan ose steril atau kapas lidi steril kemudian digoreskan pada gelas obyek setipis mungkin. Panaskan gelas obyek di atas nyala api lampu spiritus sambil diayunkan secukupnya (jarak preparat sampai nyala api kira-kira 20 cm), sampai preparat tersebut kering. Setelah kering, teteskan formalin 1 % tunggu selama 5 menit dan keringkan sekali lagi. Setelah betul-betul kering, preparat siap dicat. a.2. Bahan dari biakan cair Ambil gelas obyek yang bersih dan steril, bebaskan dari lemak dengan memanaskan di atas nyala api spiritus. Ambil kuman dari biakan cair (yang sebelumnya telah diaduk secara steril) dengan menggunakan ose steril, ratakan pada gelas obyek sehingga membentuk diameter kira-kira 1-2 cm. Preparat yang sudah dibuat kemudian dikeringkan dan ditetesi formalin dengan cara seperti pembuatan preparat langsung. a.3. Bahan dari media pertumbuhan padat Ambil gelas obyek yang bersih dan steril, bebaskan dari lemak dengan memanaskan di atas nyala api spiritus. Teteskan satu ose kaldu atau NaCl pada gelas obyek tersebut. Dengan ose steril, ambil satu koloni kuman dan ratakan pada gelas obyek sehingga membentuk diameter 1 – 2 cm, campur dengan kaldu tadi sampai homogen kemudian tipiskan. Selanjutnya dikerjakan sebagaimana membuat preparat dengan bahan berasal dari penderita. Prinsip yang selalu harus diingat dan dipatuhi adalah :
b. Cat Gram Cat Gram yang digunakan terdiri dari 4 macam, yaitu cat Gram A, B, C dan D. Masing-masing mempunyai komposisi dan fungsi yang berbeda. Komposisi dan fungsi masing-masing cat Gram, adalah sebagai berikut : 1. Cat Gram A Cat ini terdiri atas : Kristal violet : 2 gram Etil alkohol 95 : 20 ml Ammonium oksalat : 0,8 gram Akuades : 80 ml Cat Gram A berwarna ungu (karena mengandung kristal violet). Cat Gram A merupakan cat primer yang akan memberi warna mikroorganisme target. Pada saat diberi cat ini, semua mikroorganisme akan berwarna ungu sesuai warna cat Gram A. 2. Cat Gram B Cat ini terdiri atas : Yodium : 1 gram Kalium Yodida : 2 gram Akuades : 300 ml Cat Gram B berwarna coklat. Cat Gram B merupakan cat Mordan, yaitu cat atau bahan kimia yang berfungsi memfiksasi cat primer yang diserap mikroorganisme target. Akibat pemberian cat Gram B, maka pengikatan warna oleh bakteri akan lebih baik (lebih kuat). 3. Cat Gram C Cat ini terdiri atas : Aseton : 50 ml Etil alkohol 95 % : 50 ml Cat Gram C tidak berwarna. Cat ini berfungsi untuk melunturkan cat sebelumnya. Akibat pemberian cat C akan terjadi 2 kemungkinan : § Mikroorganisme (bakteri) akan tetap berwarna ungu, karena tahan terhadap alkohol. Ikatan antara cat dengan bakteri tidak dilunturkan oleh alkohol. Bakteri yang bersifat demikian disebut bakteri Gram positif. § Bakteri akan tidak berwarna, karena tidak tahan terhadap alkohol. Ikatan antara cat dengan bakteri dilunturkan oleh alkohol. Bakteri yang bersifat demikian dikelompokkan sebagai bakteri Gram negatif. 4. Cat Gram D Cat Gram D terdiri atas : Safranin : 0,25 gram Etil alkohol 95 % : 10 ml Akuades : 90 ml Cat ini berwarna merah. Cat ini merupakan cat sekunder atau kontras. Cat ini berfungsi untuk memberikan warna mikroorganisme non target. Cat sekunder mempunyai spektrum warna yang berbeda dari cat primer. Akibat pemberian cat Gram D, akan terjadi 2 kemungkinan :
Dasar teori cat Gram Berdasarkan sifat terhadap cat Gram, bakteri dapat dikelompokkan menjadi 2 yaitu bakteri Gram positif dan Gram negatif. Terdapat dua teori yang dapat menjelaskan dasar perbedaan ini yaitu : 1. Teori Salton Teori ini berdasarkan kadar lipid yang tinggi (20 %) di dalam dinding sel bakteri Gram negatif. Zat lipid ini akan larut selama pencucian dengan alkohol. Pori-pori pada dinding sel membesar, sehingga zat warna yang sudah diserap mudah dilepaskan dan bakteri menjadi tidak berwarna. Bakteri Gram positif mengalami denaturasi protein pada dinding selnya akibat pencucian dengan alkohol. Protein menjadi keras dan beku, pori-pori mengecil sehingga kompleks kristal yodium yang berwarna ungu dipertahankan dan bakteri akan tetap berwarna ungu. 2. Teori permeabilitas dinding sel Teori ini berdasarkan tebal tipisnya lapisan peptidoglikan dalam dinding sel. Bakteri Gram positif mempunyai susunan dinding yang kompak dengan lapisan peptidoglikan yang terdiri dari 30 lapisan. Permeabilitas dinding sel kurang, dan kompleks kristal yodium tidak dapat keluar. Bakteri Gram negatif mempunyai lapisan peptidoglikan yang tipis, hanya 1 – 2 lapisan dan susunan dinding selnya tidak kompak. Permeabilitas dinding sel lebih besar sehingga masih memungkinkan terlepasnya kompleks kristal yodium. CARA PENGECATAN GRAM Sebelum melakukan pengecatan Gram, siapkan alat dan bahan yang diperlukan. Pastikan semua alat dan bahan yang diperlukan serta tempat untuk mencuci terletak di tempat yang terjangkau. Jangan sampai terlalu jauh sehingga menyulitkan dan memakan waktu. Alat dan bahan yang diperlukan adalah : Alat :
Bahan :
Prosedur pengecatan Gram :
KELEBIHAN DAN KEKURANGAN PENGECATAN GRAM Kelebihan :
Kekurangan : Pengecatan Gram memerlukan mikroorganisme dalam jumlah banyak yakni lebih dari 104 per ml. Sampel yang cair dengan jumlah kecil mikroorganisme misalnya cairan serebrospinal, memerlukan prosedur sentrifuge dulu untuk mengkonsentrasikan mikroorganisme tersebut. Pellet (endapan hasil sentrifuge) kemudian dilakukan pengecatan untuk diperiksa secara mikroskopis. Sumber: Nirwati, Hera, _______, Pembuatan Preparat dan Pengecatan dalam Petunjuk Praktikum Mikrobiologi, Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta Strohl, William A, Rouse,H, Fisher, BD, 2001, Lippincott's Illustrated Reviews: Microbiology, Lippincott William & Wilkins, USA |
See what's on at the movies in your area. Find out now.
Subscribe to:
Posts (Atom)